След като клетките, в които култивираме

клетъчна фабрикаса замърсени, повечето от тях са трудни за обработка.Ако замърсените клетки са ценни и трудно се получават отново, могат да се използват следните методи за отстраняването им.

1. Използвайте антибиотици

Антибиотиците са по-ефективни при унищожаването на бактерии вклетъчни фабрики.Комбинираното лечение е по-ефективно от самостоятелното лечение.Превантивните лекарства са по-ефективни от лекарствата след заразяване.Превантивното лечение обикновено използва двоен антибиотик (пеницилин 100u/mL плюс стрептомицин 100μg/mL).След замърсяване методът на почистване трябва да бъде 5 до 10 пъти по-голям от обичайното количество.Лекарството трябва да се използва от 24 до 48 часа след добавянето и след това да се замени с обичайната рутина.Културална течност.Този метод може да бъде ефективен в ранните етапи на замърсяване.В допълнение към пеницилин и стрептомицин, използваните антибиотици могат също да включват гентамицин, канамицин, полимиксин, тетрациклин, нистатин и др. Обикновено се използват 400 до 800 μg/mL канамицин или 200 μg/mL тетрациклин.Средата се сменя на всеки 2 до 3 дни и се предава на 1 до 2 поколения за лечение.През последните години се съобщава, че 4-флуоро, 2-хидроксихинолин (ципрофлоксацин, Cip), производно на плевромутилин (производно на плевромутилин, BM-Cyclin2: BM-1 и производно на тетрациклин (BM-2)) антибиотици са ефективен при унищожаване на микоплазма, когато се използва самостоятелно или в комбинация.Всички тези три антибиотика се приготвят в 250Х концентрирани разтвори в PBS и се съхраняват при -20°C за по-късна употреба.Концентрацията на употреба Cip е 10 μg/mL, BM-1 е 10 μg/mL, а BM-2 е 5 μg/mL.Когато използвате, първо аспирирайте замърсената културална среда, добавете RPMI1640 културална среда, съдържаща BM-1, след това аспирирайте културалната среда след 3 дни, добавете RPMI1640 културална среда, съдържаща BM-2, и култивирайте в продължение на 4 дни и така нататък в продължение на 3 последователни дни .кръгове, докато се докаже с 33258 флуоресцентна оцветяваща микроскопия, че микоплазмата е елиминирана, след това се добавя нормална културална среда за култура и пасаж 3-4 пъти.

2. Топлинна обработка

Инкубирането на заразена тъканна култура при 41°C за 18 часа може да убие микоплазмата, но има неблагоприятни ефекти върху клетките.Следователно трябва да се проведе предварителен тест преди третиране, за да се изследва времето за нагряване, което може да убие микоплазмата в максимална степен и да има най-малко въздействие върху клетките.Този метод понякога е ненадежден.Ако първо се третира с лекарства и след това се загрее до 41°C, ефектът ще бъде по-добър.

3. Използвайте специфичен за микоплазма серум

Замърсяването с микоплазма може да се отстрани с 5% имунен серум на заешка микоплазма (хемаглутинационен титър 1:320 или по-висок).Тъй като специфичното антитяло може да инхибира растежа на микоплазмата, то се оказва отрицателно 11 дни след третиране с антисерум и остава отрицателно 5 месеца по-късно.е отрицателен.Този метод обаче е по-обезпокоителен и не толкова удобен и икономичен, колкото използването на антибиотици.

4. Други методи

В допълнение към гореспоменатите методи за отстраняване на замърсяване, има също методи за инокулация и стерилизация на животни, методи за фагоцитоза на макрофаги, методи за добавяне на бромурацил към замърсеникултурни бутилкии след това облъчването им със светлина и методи за филтриране и т.н., но всички те са по-обезпокоителни и неефективни.Следователно, след като възникне заразяване с микоплазма, освен ако не е от особено важна стойност, обикновено се изхвърля и култивира повторно.

моля, свържете се с Whatsapp & Wechat: +86 180 8048 1709